خطوات تركيب الببتيد

وزن 2.0 جرام من راتنج وانج الفارغ في أنبوب تفاعل نظيف وجاف، أضف 15 مل DMF، وتنشيط درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة تقريبًا.

في درجة حرارة الغرفة، تصفية المذيب من الخطوة السابقة من خلال قلب رمل وإضافة 1 ملمول 5 مولي فائض C أول حمض أميني في النهاية، 5 أضعاف المولي الزائد DMAP، 5 مولي فائض DIC، DMF هل تفاعل درجة حرارة غرفة المذيبات 3 ساعات. استخدم بعد اكتمال التفاعل، اغسل DMF 4 ~ 6 مرات، 5-6 مرات في كل مرة مل. ثم تضاف كمية مناسبة من البيريدين وأنهيدريد الخل بنسبة حجم 1:1، ويتفاعل لمدة 30 دقيقة. استخدم بعد اكتمال التفاعل، اغسل DMF 4 ~ 6 مرات، 5-6 مرات في كل مرة مل. (التأثير: حجب النقاط الدقيقة النشطة الموجودة على الراتينج الفارغ غير المتفاعل.)

إزالة المذيب من الخطوة السابقة عن طريق الترشيح بالشفط، وإضافة 10 مل 20٪ من بيبيريدين DMF يضاف الحل إلى الراتنج، N2 يحرك 10 دقيقة وأخيرا، تصفية الحل وإضافة 10 مل 20٪ من محلول بيبيريدين DMF، N2 ضربة ويقلب 5 دقائق ثم تصفية الحل وكرر هذه العملية مرتين. يغسل DMF 4 مرات، ويغسل مرتين بالميثانول، 5-6 مرات في كل مرة مل.

أخرج كمية صغيرة من الراتنج، واغسله ثلاث مرات بالميثانول، وأضف النينهيدرين، KCN، قطرة واحدة من محلول الفينول، تسخين 105 درجة -110 درجة 5 دقائق، التحول إلى اللون الأزرق الداكن هو تفاعل إيجابي، مما يشير إلى أن الإزالة كاملة ويمكن تنفيذ الخطوة التالية من التفاعل. إذا كان عديم اللون، فهذا يعني أن مجموعة الحماية لم تتم إزالتها بالكامل، ويجب تكرار عملية إزالة الحماية المذكورة أعلاه.

تزن 3 مرات فائض مولي C الحمض الأميني الثاني في النهاية، فائض مولي 3 أضعاف HBTU وفائض مولي 3 أضعاف من HOBT في أنبوب التفاعل، أضف كمية مناسبة من DMF بعد حل المحلول تمامًا، أضف فائض مولي 10 أضعاف (نقي) DIEA، تفاعل درجة حرارة الغرفة 40 دقيقة، استخدم DMF Wash 4 ~ 6 مرات، 5-6 مرات في كل مرة مل. خذ كمية صغيرة من استخدام الراتنج، اختبر باستخدام كاشف كشف النينهيدرين وسيظهر عديم اللون، ثم أضف 10 مل 20٪ من محلول إزالة البيبريدين DMF Fmoc، افعل ذلك مرتين لمدة 10 دقائق، 5 دقائق، بعد استخدام DMF اغسل 4 مرات، اغسل مرتين بالميثانول، 5-6 مرات في كل مرة مل. أخرج كمية صغيرة من استخدام الراتنج، استخدم كاشف كشف النينهيدرين للكشف عنه. إذا كان الكشف باللون الأزرق، فيمكنك المتابعة إلى الخطوة التالية من التفاعل.

أخيرًا، استخدم محلول قطع حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) قطع 2 ساعة، قم بتصفية محلول التفاعل بالشفط واحصل على محلول حمض ثلاثي فلورو أسيتيك من البولي ببتيد. تجفيف المحللة مع النيتروجين قدر الإمكان، ويعجل مع الأثير، وأجهزة الطرد المركزي، ثم يغسل مع الأثير لمدة 3 ثوان. ~ 5 مرات، تم الحصول على مادة صلبة بيضاء. بعد إذابته في الماء النقي، يقوم HPLC بتحلية وتنقية وتجميد البلورات الجافة وترسيبها، وأخذ كمية صغيرة من تحليل MS.