الكواشف لتكثيف الببتيد

في الوقت الحاضر، في تركيب الببتيدات، تستخدم طرق تنشيط الكربوكسيل بشكل رئيسي لإكمال تفاعلات الببتيد. كانت الطرق الأولى المستخدمة هي تنشيط الأحماض الأمينية إلى كلوريدات الحمض، والأزيدات، وأنهيدريدات متناظرة، وأنهيدريدات حمضية مختلطة. ومع ذلك، ونظراً لوجود سباقات الأحماض الأمينية في هذه الظروف، وخطر كواشف التفاعل وتعقيد تحضيرها، تم استبدالها تدريجياً بكواشف التكثيف اللاحقة، والتي يمكن تقسيمها إلى نوعين حسب بنيتها.: كواشف التكثيف الرئيسية هي: نوع الكاربوديميد، نوع ملح الأونيوم (اليورونيوم).

تشمل بشكل رئيسي: DCC، DIC، EDC.HCl الانتظار. استخدم DCC لإجراء التفاعل، بسبب وجود DCU، DMF لديه قابلية ذوبان قليلة جدًا وينتج راسبًا أبيض، لذلك لا يتم استخدامه عمومًا في تخليق الطور الصلب -. ومع ذلك، نظرًا لأنه رخيص الثمن، فيمكن إزالته عن طريق الترشيح في تركيب الطور-السائل، ولا يزال يستخدم على نطاق واسع. EDC.HCl بسبب قابليته للذوبان في الماء، فإنه غالبًا ما يستخدم في ربط البوليبيبتيدات والبروتينات، كما أنه ناجح جدًا. ومع ذلك، فإن أحد أكبر عيوب هذا النوع من كواشف التكثيف هو أنه إذا تم استخدامه بمفرده، فسيكون هناك المزيد من التفاعلات الجانبية. ومع ذلك، تظهر الأبحاث أنه إذا تمت إضافتها أثناء عملية التنشيط HOBt، فإن مثل هذه الكواشف يمكنها التحكم في التفاعلات الجانبية إلى نطاق منخفض جدًا. آلية التفاعل هي كما يلي:

الشكل 2: آلية رد فعل تفعيل مدينة دبي للإنترنت

تتميز كواشف التكثيف من نوع ملح الأونيوم بتفاعلية عالية وسرعة عالية، وهي الآن تستخدم على نطاق واسع، بما في ذلك: HBTU، TBTU، HATU، PyBOP wait. أثناء استخدام هذا الكاشف، يجب إضافة قاعدة عضوية، مثل ثنائي إيزوبروبيل إيثيل أمين (DIEA)، N- ميثيل مورفولين (NMM)، ولا يمكن تنشيط الحمض الأميني إلا بعد إضافة هذا الكاشف. آلية التفاعل هي كما يلي:

الراتنجات المستخدمة في - تركيب الببتيد الصلب هي عمومًا مواد بوليسترين- ديفينيل بنزين، بأحجام تتراوح من 75 إلى 150 ميكرومتر، ودرجة الارتباط المتقاطع - تتراوح بين 1-2%، ومعظم المواد المستخدمة الآن هي 1%، لأنه عند هذه الدرجة من الارتباط المتقاطع، فإن الراتنج DMF، DCM يتمتع بخصائص تورم جيدة وله بنية شبكية ثلاثية الأبعاد-، ويمكن للجزيئات المتفاعلة أن تتحرك بحرية داخل الراتنج. الجزء الأكثر أهمية في الراتينج هو ذراع التوصيل، الذي يتصل بالراتنج من أحد الطرفين ويعمل كموقع تفاعل في الطرف الآخر. الراتنجات المستخدمة حاليًا على نطاق واسع هي: PAM، MBHA، Wang، 2-Cl-Trt، Rink-Amide-MBHA wait. في PAM، يتم استخدام MBHA في استراتيجية BOC، لأنه مستقر جدًا للحمض، ويجب أن يكون HF، TFMSA ولا يمكن قطعه إلا في ظل ظروف حمضية قوية.

بعد اكتمال تركيب - المرحلة الصلبة من الببتيد، يجب تحديد كاشف انقسام مناسب لفصل الببتيد من الراتنج، ثم الترسيب مع الأثير الجليدي، وجمع الراسب عن طريق الطرد المركزي، وفصل HPLC، وتنقيته، وتجميده -جافًا للحصول على منتج الببتيد النهائي.

بسبب اختلاف الراتنجات وتسلسلات الأحماض الأمينية المختارة، فإن طرق الانقسام المختارة أثناء الانقسام ليست هي نفسها تمامًا. بشكل عام، يتم اختيار ظروف الانقسام في ظل الظروف الحمضية. بالنسبة لـ PAM، يجب إضافة راتنجات MBHA، والقطع HF المستخدم بشكل عام، وp-cresol، وp-mercaptophenol، والأنيسول والكواشف الأخرى أثناء عملية القطع. وبالنسبة لـ Wang، Rink-Amide، Trt الراتنج، قطع TFA المستخدم بشكل عام، أضف جلايكول الإيثيلين، كبريتيد الأنيسول، الماء، ثلاثي إيزوبروبيلسيلان، الفينول، وما إلى ذلك أثناء عملية القطع.

تُستخدم هذه الكواشف المضافة بشكل أساسي ككواشف لالتقاط الكربوكاتيون. والغرض من ذلك هو التقاط الكاتيونات الكربونية المتولدة أثناء تفاعل الانقسام وتقليل التفاعلات الجانبية الناتجة عن هجوم أيونات الكاتيونات الكربونية على بعض السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية. تشمل الأحماض الأمينية التي من المرجح أن تنتج تفاعلات جانبية ما يلي: Trp، Tyr. جرعة كاشف القطع بشكل عام هي 10-15 مل/جم من الراتنج.

نسب القطع شائعة الاستخدام: HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5)، TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5)، يتم إجراء التفاعل عادةً عند درجة حرارة الغرفة من ساعتين إلى 4 ساعات.

في -المرحلة الصلبة من تخليق الببتيد، غالبًا ما نواجه مشكلة فشل تخليق الببتيد أو انخفاض كفاءة التخليق. يرجع السبب الرئيسي إلى تسلسل الببتيد، لأن بعض تسلسلات الببتيد تتشكل على الراتينج. -يؤدي الطي إلى تغيير خصائص التورم للراتنج، وقد يؤدي أيضًا إلى دفن المواقع النشطة للتفاعل في الراتينج، مما يجعل من الصعب استمرار التفاعل. التقارير الحالية تشير إلى ذلك

استخدام المذيبات المختلطة، DMSO / DMF، 6N Guanidine / DMF الحل

قم بزيادة درجة حرارة التفاعل أو استخدم طريقة الميكروويف

استخدم أملاح الفوضى، LiCl، NaClO4 انتظر.

استخدم تلك التي تتمتع بخصائص تورم أفضل PEG-PS الراتنج، مع تقليل تحميل الراتنج (0.05-0.2 مليمول/جم)

​